Il
terreno colturale SOB é stato originalmente messo a punto da Hanahan per preparare
le cellule competenti prima della trasformazione, al fine di
massimizzare l’efficienza del processo di trasformazione stesso. La
trasformazione richiede che le cellule del batterio siano “perforate”
( è questo che rende le cellule “competenti”) affinché
sia possibile l’introduzione del DNA estraneo nella cellula. Le
cellule competenti di Escherichia
coli,
perché possano sopravvivere al processo di “perforazione”,
richiedono un mezzo colturale nutritivo ricco e ben bilanciato dal
punto di vista isotonico.
Il
triptone e l’estratto di lievito sono fonti di azoto, vitamine,
fattori di crescita e di carboidrati, che aiutano le cellule a
riprendersi dallo stress della trasformazione e conseguentemente
potranno crescere bene.
Il
cloruro di sodio e il cloruro di potassio contribuiscono a definire
un ambiente isotonico equilibrato.
Il
solfato di magnesio fornisce gli ioni magnesio necessari per una
svariata gamma di reazioni enzimatiche, inclusa la replicazione del
DNA.
Il
terreno colturale SOC è utilizzato nello stadio finale della
trasformazione e si prepara aggiungendo glucosio alla concentrazione
di 20mM finale nel terreno SOB. Il glucosio aggiunto rappresenta una
fonte di carbonio e di energia immediatamente disponibile per Escherichia
coli,
che può curare le ferite dovute al processo di “perforazione”
e può replicarsi.
Hanahan,
D., Studies on trasformation of Escherichia coli with plasmids,
J.Mol.Biol., 166,
557, 1983.
Difco
Manual 11th edition, Sparks, MD, (1998), 22-23.
Sambrook,
J., E.F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular cloning: a
laboratory manual, 2nd edition, ed., Cold Spring Harbour Laboratory, Cold Spring Harbour,
N.Y.
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